激肽釋放酶2Elisa試劑盒質(zhì)控質(zhì)檢操作流程
點擊次數(shù)：1421 更新時間：2022-07-21
激肽釋放酶裂解激肽原產(chǎn)生激肽，主要有緩激肽、胰激肽及蛋氨酰胰激肽，賴氨酰緩激肽可被尿液及血液中的氨基肽酶降解為緩激肽。因都具有緩激肽的結(jié)構(gòu)，故作用相似，其中緩激肽作用最強，胰激肽的活性只有緩激肽的1/2，而蛋氨酰胰激肽的活性則只有其1/3。激肽與激肽受體結(jié)合后參與機體許多組織器官的功能調(diào)節(jié)和病理生理過程。
激肽釋放酶2Elisa試劑盒質(zhì)控質(zhì)檢操作流程：
?。?）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
?。?）洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
?。?）陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。
?。?）酶標板置37℃箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。
?。?）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔工作液100μl。
?。?）酶標板置37℃箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
?。?）洗板，陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。
?。?0）每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
?。?1）每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應。
（12）分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以由容器上的劃痕或指印等造成的光。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定。
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